外周血由于采集难度小 ，一直是疾病标志物研究和临床诊断应用的主要载体 。外周血蛋白标志物的检测更是能够监控疾病的动态变化 ，成为主要的标志物类型 。尤其是对于非肿瘤疾病 ，在没有CTC细胞和ctDNA作为协同标志物的前提下 ，外周血中蛋白标志物的筛选与检测就显得尤为重要 。

      然而 ，外周血中的蛋白质高度复杂 ，动态范围达11-12个数量级 ，既有以白蛋白（Albumin）为代表的mg级的高丰度蛋白质（占据外周血总蛋白质量的99%） ，又有以细胞因子为代表的fg级蛋白质 。因此 ，对于外周血蛋白标志物的筛选和研究也充满着挑战 。

 

 

 

 

 

     一般情况下 ，对于复杂的蛋白质的筛选来说 ，液相色谱-质谱串联（LC-MS/MS）技术成为首选 。然而 ，常规LC-MS/MS技术基于bottom-up的筛选策略（将所有蛋白质无差别的酶解成多肽后 ，同步进入质谱进行检测） ，在大量高丰度蛋白存在的情况下 ，LC-MS/MS往往会更倾向于检出高丰度蛋白质 ，对于ng级以下的低丰度蛋白质（尤其是IL-1β 、IL-6 、INF-γ等重要细胞因子）的检测能力严重不足 。

      同时 ，外周血中的蛋白质来源丰富 ，既有细胞凋亡脱落的表面蛋白 ，也有细胞主动分泌的细胞因子 ，还有多种细胞分泌的外泌体所携带的蛋白质等 。经过大量实验数据累积 ，我们发现在外周血蛋白质组研究如果仅用传统的LC-MS/MS实验方案进行筛选 ，数据始终是片面的 。同样的血浆样品 ，用LC-MS/MS和Antibody Array技术所筛选到的蛋白种类和功能类别交叉性很少 ，而外泌体携带的蛋白质既与血浆total蛋白组检出数据有一定的交集 。同时 ，对于特定类型的蛋白质 ，外泌体也具有显著的富集效果（如下图） ：

|   腾博会官网生物外周血蛋白质组学分析

      为获得高质量的外周血蛋白质组数据 ，腾博会官网生物在检测方法上进行了创新升级 ，以尽可能观测到外周血蛋白质组的全谱 ，形成了独特的外泌体蛋白组“1+1+1”体系 。

●   首先 ，利用FAIMS和TIMS为代表的4D质谱预处理装置 ，对进入MS前的离子进行预筛选 ，简称“离子过滤” 。通过电场和氮气源的综合作用 ，将特定离子尤其是1价杂离子进行有效去除 ，提高进入质谱仪的离子纯度 ，进而在传统LC-MS/MS鉴定深度的基础上再提高10%-20%的鉴定蛋白谱 。

●   进一步 ，腾博会官网生物利用特色的抗体芯片技术对于LC-MS/MS所不能识别的分泌蛋白类型进行补充鉴定 ，一次性可特异性的检测500+种蛋白质 ，极大地丰富了外周血低丰度蛋白谱 。

●   同时 ，腾博会官网生物利用在外泌体定量蛋白质组学上的优势 ，在获得高纯度外泌体的基础上 ，利用LC-MS/MS技术进行深度的外泌体蛋白质组解析 ，将对于外周血中的蛋白谱 ，尤其是外泌体携带的母本细胞的膜蛋白谱进行更加全面的覆盖 。

|   经典案例

      国家蛋白质组中心研究团队发现银屑病治疗中成药“银屑灵”在临床上对不同患者疗效存在差异性 ，为在治疗前帮助临床医生找到“银屑灵”的适应患者 ，研究人员利用深度蛋白质组学技术（LC-MS/MS 结合 Antibody Array）的策略开展用药伴随标志物研究 。

      研究结果显示 ：利用LC-MS/MS的DIA技术筛选到的蛋白质与Antibody Array筛选到的蛋白质的种类具有明显的分界线 ，即LC-MS/MS筛选到的蛋白谱主要集中在血清中ng级以上的蛋白质群体 ，而Antibody Array筛选到的蛋白谱主要集中在ng-pg级的蛋白质群体中 。同时 ，两种技术均发现了一些“银屑灵”差异响应（Responder  vs  Non-responder）蛋白质 ，组合两种技术筛选到的蛋白标志物可以更为有效地对“银屑灵”差异响应患者进行区分 。

|   相关文献

[1]. Xihao Du, Qingli Zhang, Yixuan Jiang ，et al. Dynamic molecular choreography induced by traffic exposure: A randomized, crossover trial using multi-omics profiling. J Hazard Mater. 2022 Feb 15;424(Pt A):127359.（复旦大学公卫学院 血浆）IF=13.6

[2]. Meng Xu, Jingwen Deng, Kaikun Xu, et al. In-depth serum proteomics reveals biomarkers of psoriasis severity and response to traditional Chinese medicine. Theranostics, 2019, 9(9):2475-2488（蛋白质组学国家重点实验室 血清）IF=12.4