qEV尺寸排阻分离柱是由新西兰IZON公司研发和生产的一种基于尺寸排阻法色谱法（Size Exclusion Chromatography, SEC）原理的外泌体分离-纯化技术 。该技术具有简便 、快速 、容易标准化操作的特点 ，只需要15min就可以从多种类型样本中提取到完整的高纯度外泌体 。并且相较于其他方法 ，qEV所提取的外泌体纯度更高 、浓度更高 、活性也更高 ，还可以重复使用 。qEV分离的外泌体尤其适用于外泌体蛋白组和外泌体功能实验之用 。

 

 

 

|   qEV尺寸排阻外泌体分离柱-原理

        qEV是基于分子排阻法SEC原理 ，按照分子粒径进行分段分离的方法 。将生物样品流经具有固定孔隙的SEC填充物 ，吸附粒径较小的分子如蛋白 、脂类等 ，而较大粒径的分子或颗粒不能进入孔隙 。在缓冲液的作用下 ，较大粒径的囊泡（外泌体）流速快 ，在特定的阶段会被洗脱出来进入样品收集管 ，成为实验样品 ，而小分子物质则需要更长的洗脱时间 ，最终在特定时间流入废液缸 。

|   qEV尺寸排阻外泌体分离柱-操作流程（点击观看视频）

1. 用洗脱缓冲液冲洗柱子 。

2. 装入500μL样品 。

3. 最开始的3ml是空隙体积 ，继续向分离柱中添加PBS以洗脱囊泡（外泌体） 。

4. 收集空隙体积后的1.5mL液体为高纯度外泌体 。

|   qEV尺寸排阻外泌体分离柱-优势

 ●   高纯度 ：去除99%以上的可溶性蛋白质 ，去除95%以上高密度脂蛋白

 ●   无损伤 ：保持细胞外囊泡的完整性和生物功能

 ●  标准化 ：每根分离柱均经过标准化 、质量保证 ，并通过ISO13485标准认证

 ●  可靠性 ：只要15min就可以得到完整外泌体样本 ，已经在大规模的实验室试验得到证实

 ●  适用性 ：适用于多种类型样品的外泌体提取 ，包括 ：血清 、血浆 、尿液 、细胞上清 、脑脊液 、唾液等；尤其适用于外泌体功能研究中 ，用于细胞培养或动物注射的高纯度外泌体的获得

       如上图所示 ，血清样品中收集的组分 ，用qNano其进行定量测量 。在280纳米处用吸光度法测定蛋白质的相对浓度 。数据表明 ，收集的第7至9组分具有最高浓度的囊泡(外泌体),而污染的血清蛋白洗脱的分数为第11至30组分(左图) 。通过比较分离前和分离后的囊泡(外泌体)与蛋白质浓度比 ，第7组分的囊泡富集量为蛋白质的6000倍(右图) 。根据样品的不同 ，如果下游分析分别需要更高的囊泡(外泌体)纯度或更高的囊泡(外泌体)产量 ，可将第7至9部分或第7至11部分汇集在一起 。

|   qEV尺寸排阻外泌体分离柱-产品规格

qEV与超速离心技术的对比

案例1   尺寸排阻SEC比超离UC获取外泌体的纯度更高

       该文献通过对滑膜液经过相同的预处理后 ，分别使用超离 、密度梯度离心和尺寸排阻进行外泌体的分离 。并通过WB 、TEM对其进行鉴定分析 。

      上图中红框所示的ApoA-1是HDL的标志物 ，可以发现UC和DGC都无法有效去除HDL ，而SEC的WB图中 ，外泌体标志物的出现和HDL标志物和血清白蛋白的出现几乎不存在时间上的重叠 ，所以SEC可以收集到比较纯净的外泌体 。

       上图中超离电镜下的图像 ，不仅背景杂质多 ，而且发生了聚集现象 ，这种聚集会对下游分析产生较大不利影响 。相比之下 ，SEC的背景纯净 ，外泌体特征明显 。

案例2   尺寸排阻SEC比超离UC获取外泌体生物活性更强

       该实验研究了使用超离UC和尺寸排阻SEC分离的心肌祖细胞(HMECs)培养液的外泌体的功能可能的差异 。通过外泌体刺激细胞 ，诱导EKR磷酸化 ，然后通过比较外泌体刺激后的pEKR和EKR的比率 ，来评价不同分离方法制备外泌体的功能活性 。

      上图WB显示 ，在相同条件下 ，无论总蛋白量变化还是粒子数变化 ，用SEC的方法比超离他的pERK / ERK比率更高 ，表明SEC收集到的外泌体具有更高的生物活性 。

案例3 尺寸排阻SEC比超离UTC更适合进行血浆外泌体蛋白质组学分析

       该文献通过高分辨质谱分析 ，比较了SEC和UTC分离的血浆外泌体 ，在五次技术重复中鉴定的蛋白数量 、信号强度等方面的差异 。结果发现 ，相较于超离 ，SEC得到的外泌体 ，蛋白鉴定数量更多（图A ，SEC 1,268±102 ，UTC 319±45） ，相同蛋白的定量CV值更小（图B ，SEC 562种蛋白质的CV低于25% ，而UTC只有73种蛋白质达到这一阈值）,且相同外泌体marker蛋白 ，SEC信号值普遍比UTC更高（图C） 。

      上述几篇文献将尺寸排阻SEC与超离UC 、密度梯度离心DGC在收集到外泌体的纯度 、生物活性和得率方面作比较 ，通过实验数据 、电镜图 、WB图像 ，发现SEC相较于其他两种分离方法 ，获取的外泌体纯度更高 、生物活性更强 、更适合蛋白组学实验 。

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