外泌体研究
外泌体研究
EIQ3外泌体提取试剂盒
经典的超速离心法(差速离心) 、密度梯度离心法在外泌体制备过程中经常受到大型仪器的资源限制 ,并且操作复杂 、耗时 、外泌体得率也低 。腾博会官网生物自主研发的Exosome Isolation Q3(简称EIQ3)系列沉淀法外泌体提取剂盒 ,不仅有效提高外泌体得率 ,同时经过技术改良 ,能够显著减少杂蛋白残留(如血清高丰度蛋白) 。该试剂盒可以实现血清 、血浆 、尿液 、细胞上清等液质样本中外泌体的快速提取 ,为后期外泌体研究的数据稳定性和可靠性提供保障 。
| EIQ3外泌体提取试剂盒-产品规格
货号 | 适用样本类型 | 规格 | 说明 |
EIQ3-01001 | 血清 | 150 rxns | 以200μL 血清样本为一次反应 |
EIQ3-02001 | 血浆 、脑脊液 | 150 rxns | 以200μL 血浆样本为一次反应 |
EIQ3-03001 | 尿液 | 10 rxns | 以10mL 尿液样本为一次反应 |
EIQ3-04001 | 细胞上清 、房水 、脑脊液 | 10 rxns | 以10mL 细胞上清样本为一次反应 |
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| EIQ3外泌体提取试剂盒-优势
● 外泌体纯度高(Quality)
● 外泌体得率高(Quantity)
● 操作简便 ,周期短(Quick)
| EIQ3外泌体提取试剂盒-操作流程
| EIQ3外泌体提取试剂盒 - 实用效果
应用腾博会官网生物EIQ3系列外泌体提取试剂盒提取的外泌体 ,可用于不同的外泌体鉴定实验 ,包括电镜观察 ,NTA分析 ,Western Blot鉴定外泌体marker等 。以下实测结果以血清/尿液外泌体提取数据为例进行展示和分析 :
EIQ3与超速离心等技术对比
案例 EIQ3提取的外泌体进行全转录测序的结果与UC更为接近
上海交通大学医学院附属瑞金医院的科研人员开展了一项研究(PMID: 32716349) ,系统地比较了多种商业化试剂盒与UC法提取血浆外泌体的差异 ,以为科研人员选择商业化试剂盒提取外泌体提供的参考[6] 。研究人员入组了9例癌症患者(其中正常对照 、早期患者 、转移患者各3例) ,将同组患者的血浆合并 ,总共得到3份血浆样本 ,每组的血浆样本分为6等分 ,分别采用5种商业试剂盒包括Wayen Exosome Isolation kit(WY ,腾博会官网生物EIQ3) 、ExoQuick(SBI) 、miRCURY Exosome Kits(Qiagen) 、Ribo Exosome Isolation Reagent(Ribo) 、Total Exosome Isolation (Fisher)和UC(ultracentrifugation)分离外泌体 。最后 ,对分离得到的外泌体进行转录组测序 ,比较各种分离方法在测序结果上的差异(图1) 。
图1.各种外泌体提取试剂盒和超速离心方法的操作流程
首先 ,各种试剂盒在提取的外泌体粒径上并无明显差异 ,检测的外泌体粒径均在100 nm左右(图2A) 。但相对其他试剂盒 ,Wayen Exosome Isolation kit在外泌体提取浓度上相对较高 ,1mL血浆样本含有更多的外泌体颗粒 ,而UC提取的外泌体浓度在所有方法中相对较低(图2B) 。
图2. 各种方法分离的外泌体粒径和浓度的比较
图3.各种方法分离的外泌体evRNA文库长度分布的比较
接着 ,研究人员对比分析了各种试剂盒提取的血浆外泌体中各种类型RNA的比例 ,发现Wayen Exosome Isolation kit的表现和UC更为接近 ,所测得的short-noncoding RNA, pseudogene, long-noncoding RNA 及protein-coding genes比例基本相同 ,而其他试剂盒检测结果与UC存在较大差异(图4) 。
图4. 不同方法分离的外泌体中各类RNA的比例
最后 ,关于各种方法提取的外泌体进行RNA的聚类分析 ,无论是Control组 、primary组 ,还是metastatic组 ,同样是Wayen Exosome Isolation kit提取的外泌体RNA与UC组更为接近(图5) 。
图5. 不同方法分离的外泌体中RNA聚类分析
总体来说 ,EIQ3提取的血浆外泌体在用于转录组分析上 ,其表现与UC更为接近 。
结合上述实验结果 ,以及UC和EIQ3的分离特点 ,我们提出如下建议 :
1. 当我们样本量较少的时候 ,UC得到的外泌体量会较少 ,可以考虑采用腾博会官网生物EIQ3试剂盒;
2. 当我们样本量足够 ,想要得到更多外泌体或者浓缩外泌体用于下游实验的时候 ,可以考虑采用腾博会官网生物EIQ3试剂盒;
3. 当我们通过UC或者密度梯度离心获得的高纯度外泌体完成核酸或者蛋白组筛选后 ,进一步需要对个别分子进行验证实验的时候 ,采用腾博会官网生物EIQ3试剂盒提取外泌体更方便 ,也更容易标准化 。
4. 针对外泌体核酸测序等实验 ,采用腾博会官网生物EIQ3试剂盒不仅能够接近UC的外泌体得率问题 ,而且能够获得与UC更为接近的核酸谱 。
| 客户文献
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[3]. Liu Huawei, Zhao Fan, Zhang Kai, et al. Lactobacillus plantarumInvestigating the growth performance, meat quality, immune function and proteomic profiles of plasmal exosomes in -treated broilers with immunological stress. Food Funct, 2021, 12: 11790-11807.
[4]. Li Yun, Ji Jin, Lyu Ji, et al. A Novel Urine Exosomal lncRNA Assay to Improve the Detection of Prostate Cancer at Initial Biopsy: A Retrospective Multicenter Diagnostic Feasibility Study. Cancers (Basel), 2021, 13: undefined.
[5]. Song Zhiqi, Xu Yanfeng, Zhang Ling, et al. Comprehensive Proteomic Profiling of Urinary Exosomes and Identification of Potential Non-invasive Early Biomarkers of Alzheimer's Disease in 5XFAD Mouse Model. Front Genet, 2020, 11: 565479.
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[7].Yang, Q. et al. Novel Biomarkers of Dynamic Blood PD-L1 Expression for Immune Checkpoint Inhibitors in Advanced Non-Small-Cell Lung Cancer Patients. Front. Immunol. 12, 665133 (2021). IF=8.0
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