细数近几年的研究热点 ，最火爆的莫过于外泌体 。外泌体相关国自然基金支持力度也逐年上涨 ，2019年更是达到了2.54亿元 ，较去年增长44.5%（图1） 。

外泌体分离是外泌体研究的第一步 ，也是至关重要的一步 。只有得到高纯度有活性的外泌体 ，才能在下游功能和内容物分析中获得准确数据 。然而 ，目前国际上还没有特别完美的分离方法 。

两步超速离心（UC）分离法（图2） ，是由法国居里研究院的Théry博士提出的 ，利用外泌体的理化性质分离外泌体的技术 ，该方法是目前最为经典的外泌体分离方法 ，也是文献报道最多的分离方法 。

然而 ，UC分离方法过程繁琐 、耗时耗力 。同时 ，UC分离方法 ，对操作人员经验依赖性很强（相信很多人都有使用UC的痛苦回忆） ，导致实验结果重复性很差 。诸多因素限制了UC方法在外泌体生产和临床上的应用 。除此之外 ，UC方法从技术原理上还有一些更为致命的缺点 ，让我们通过技术文献的报道进行全面了解 ：

|   UC缺陷一 ：外泌体回收率低

|   UC缺陷二 ：引起外泌体聚集并破坏其完整性

越来越多的证据表明 ，超高的速度离心会对外泌体的完整性产生负面影响 ：UC可能导致样本中外泌体与其他非晶颗粒的聚集和共沉淀 ，甚至导致外泌体的破裂或与污染物以及其他蛋白质融合 ，影响外泌体的物理性质和下游分析 。

免疫电镜下 ，观测到免疫胶体金标记（CD41）的超离后

得到的外泌体发生聚集现象 。右图为左图白色方框放大后

的景象 ，大量具有典型茶托状结构的外泌体聚集在一起 。

看完上述分析 ，想必大家都会对超离有种“累觉不爱”的心情 。

SEC是将具有特定孔径的多孔聚合物填充在分离柱中 。当含有外泌体的样本在重力作用下流经填充物时 ，粒径小于微球孔径的物质会进入到孔隙之中 ，被暂时捕获 。而大于孔径的物质（如外泌体）则不会进入孔隙 ，更快的被洗脱出来 ，从而实现外泌体的分离纯化 。

根据ISEV（国际胞外囊泡协会）开发的数据库EV-TRACK统计 ，2017年 ，使用基于SEC方法分离外泌体的文章数量位居第二 ，仅次于超离 。

(Marta Monguió-Tortajada , et al. CMLS, 2019)

|   SEC优势一 ：杂蛋白去除率高 ，纯度高

研究人员对比了SEC和UC分离外泌体的纯度 ，使用ELISA试剂盒分析了分离后的外泌体中铁蛋白复合物的污染情况 ，发现SEC与UC相比 ，该蛋白的丰度降低了100倍 。经过进一步的蛋白组学分析 ，发现两种方法都能够很好的匹配外泌体相关蛋白 ，但是UC制备外泌体中含有大量独特的图谱蛋白 。表明SEC分离的外泌体具有更高的纯度 。

该实验基于CPC(心肌祖细胞)衍生的外泌体通过诱导ERK磷酸化 ，激活 MAPK1/2-ERK1/2通路 ，进而刺激人微血管内皮细胞(HMECs)迁移 ，这样一个前提 。研究人员分别使用UC和SEC分离CPC培养上清中的外泌体 ，刺激HMECs ，通过比较外泌体刺激后的pERK / ERK ，分析两种方法所得外泌体在功能活性上的差异 。

在之后的实验中 ，实验人员先是分析了相同总蛋白质量下的Western Blot结果 ，通过对比 ，SEC制备外泌体的pERK / ERK比UC更高 ，两个蛋白质量下的两次重复结果相同 。但是考虑到可能SEC方法制备的外泌体纯度更高 ，相同蛋白质量内含有的外泌体更多 ，从而pERK/ERK更大 。于是研究人员又进行了相同总粒子数下的pERK/ERK对比 ，结果相同 。表明SEC制备外泌体具有更高的活性 ，更适合进行功能学研究 。

做外泌体功能实验屡次失败的小伙伴仿佛看到了希望的曙光了 ！ ！

那么 ，问题来了 ，在哪能够买到SEC呢？

腾博会官网生物技术人员也是操碎了心 ，专门从新西兰的IZON公司引进了qEV外泌体分离柱（SEC）系列产品 ，以满足中国科研人员的多元化需求 。

根据样品体积和理化性质的不同 ，qEV共分为5个产品类型 ，可兼容血浆 、血清 、胸水 、腹水 、脑脊液和尿液等多种样本类型 。其中qEVoriginal为最常用类型 ，而qEV100是新上市产品 ，上样量100mL ，可满足体积大浓度低的样本 ，如细胞培养上清和尿液等 。

根据下游分析对外泌体纯度和浓度的不同需求 ，每个类型的分离柱又分为35nm和70nm两种规格 ，用户可根据自身需求选择 。对比图如下 ：

除了分离柱 ，还有配套的分离柱支架 ，以及自动组分收集器(AFC) ，供客户选购 。

AFC(Automatic Fraction Collector)是IZON自主研发的外泌体自动收集装置 ，是qEV平台的一项重大改进 ，实现了自动化智能化分离外泌体 。具有以下优势 ：

●   高效性 ：可同时批量处理多个样本 。

●   易操作 ：通过触控屏操作 ，设定简单易懂 ，机身轻巧 。

●   高精度 ：精确测量每个液滴的重量 。

●   自动化 ：自动收集外泌体 ，并通过LED氛围灯实时反馈信息 。

腾博会官网生物作为新西兰IZON在中国的特约合作伙伴和示范实验室 ，还可以为您提供基于SEC和TRPS技术的外泌体研究技术服务 ，协助您用最小的成本体验到SEC和TRPS技术的魅力 。