|   研究背景 ：

|   模型建立及评估 ：

      为了探讨QHD的具体治疗机制 ，研究者将小鼠随机分为四组进行喂养 ：1. control组（n=9 ，普通饲料喂养）；2. 高脂饮食（HFD）组（n=9 ，HFD喂养）；3. QHD组（n=9 ，HFD喂养12周后灌喂QHD）；4. NaB组（n=9 ，HFD喂养12周后灌喂丁酸钠（NaB）作为阳性对照组） 。

      首先对模型进行评估 ，肝组织染色结果发现 ，在16周的HFD喂养中 ，观察到肝细胞表现出严重的脂肪变性 ，表现为H&E染色呈现气球状变性 ，而在QHD和NaB改善了高脂饮食引起的这种肝脏组织学变化 。（见图1）

      另外研究者也从体重和肝损伤参数 ，包括非酒精性脂肪肝（NAFLD）活动评分 、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和肝甘油三酯（TG）这几个指标来观察模型的表现 ，发现QHD和NaB组都具有良好的治疗效果 ，见图2 。

|   机理探索与构建 ：

      在明确了表型后 ，作者首先进行了16SrRNA测序 ，分析了肠道菌群的多样性 ，发现虽然QHD逆转了HFD饲养所改变的8种菌属 ，但进一步研究已鉴定的革兰氏阴性菌（LPS的来源）的总丰度 ，发现与对照组相比 ，HFD喂养小鼠的革兰氏阴性菌丰度增加 ，但无统计学意义；QHD组革兰阴性菌的数量与HFD组相比无明显变化 ，甚至高于对照组 。肠道菌群测序结果说明 ，QHD并没有通过调控肠道中LPS来源的菌种数量来降低LPS的水平 。

      然而通过RT-PCR检测的肠道紧密性相关基因的mRNA表达量变化可以看到 ，QHD组和NaB组相比于HFD组实现了回调 ，见图3 。既然不是通过减少损伤物质的来源起作用 ，那么QHD很可能是通过对肠道的紧密性起到了保护和修复作用 ，进而实现其治疗效用的 。

图3 QHD对肠道紧密性相关基因mRNA表达调节

      那么药物到底是如何影响肠道紧密性的呢？

      中药本身具有多靶点的特性 ，中药复方的机理研究更是难度重重 。面对中药复方可能调控的复杂信号通路网络 ，研究人员与腾博会官网生物合作 ，采用了PEX100磷酸化抗体芯片技术 ，对小鼠结直肠组织中的31条信号通路磷酸化水平进行广泛筛选 。抗体芯片结果显示 ，不论是模型组比空白组 ，还是给药组比模型组 ，MAPK通路的变化均最为显著 ，见图4 。

      而根据以往的报道 ，MAPK途径也确实与LPS的刺激调节紧密相关 。作者根据抗体芯片结果 ，快速锁定了复杂的MAPK通路上几个关键的调变蛋白和磷酸化位点 ，并通过Western bot验证发现 ，与芯片结果一致 ，JNK 、ERK1/2和MYPT1的磷酸化水平在LPS诱导后明显上调 ，而在QHD的作用下发生下调 。见图5 。

      同时 ，对小鼠结肠切片中的ZO-1（肠道紧密性相关指标）和p-MYPT1（MAPK通路成员）进行免疫荧光染色 ，电镜观察显示 ：LPS刺激后 ，小鼠结肠中ZO-1信号变弱 ，pMYPT1信号变强 ，说明肠道通透性增加 ，肠道出现损伤；QHD可通过恢复ZO-1蛋白的表达 ，抑制pMYPT1的磷酸化 ，最终改善肠道紧密性 ，见图6 。

图6 结直肠组织免疫荧光染色

|   分析与展望 ：

      中药方剂是中医治病的基础 ，是中医学的核心 ，很多名方古方 ，经过上千年的临床实践验证 ，其疗效得到了医生和病人的广泛认可 。然而 ，在高质量的SCI杂志中关于中药复方的机理与临床观察相关研究报道均屈指可数 。

      腾博会官网视角认为可能有以下几个主要原因 ：

      1. SCI科学体系的基础是要求可重复性 ，中医复方制剂的标准化成为主要门槛 。本文采用的祛湿化瘀汤（QHD）是商品化产品 ，具有国家发明专利（ZL200610009140.0.0） ，其药物间的配伍比例与药用成分的提取 ，均做到了标准化 ，因此具备了发表SCI文章的前提 。

      2. 中药多靶点的特点与机理的复杂性 ，是制约中药复方开展深入研究又一瓶颈 。本研究中选取的高脂诱导的NASH动物模型 ，具有广泛的认可度 ，由于是代谢性疾病 ，对于肠道菌群与肝脏炎性调控的联合分析 ，既符合现代科学的基本认知 ，又兼顾了中药机理的复杂性与系统性 。

      3. 信号通路是大多数药物机理研究的主要抓手 ，中药复方对实体组织和细胞的信号通路调控一定是复杂的 。传统的研究方案仅仅通过前人报道 ，选取个别信号通路和蛋白质 ，利用RT-PCR或者Western blot进行检测 ，很难获得全面的有说服力的结果 ，与中药的复杂性不能匹配 。而采用网络药理学等生物信息手段 ，分析出的药物调控通路又没有广泛的实验证据的验证支持 ，这些问题都制约了中药复方研究在SCI杂志中的发表频率 。

      本研究中 ，作者选用了PEX100磷酸化信号通路广谱筛选抗体芯片 ，对大多数经典信号通路均进行了系统筛选 ，数据具有广泛性和说服力 。通过数据分析发现的MAPK通路参与到NASH的形成 ，符合经典的病理学认知 。研究阐述了祛湿化瘀汤（QHD）通过调控MAPK通路关键蛋白的磷酸化变化最终治疗NASH的结论 ，理论依据充分 ，数据广泛也具有针对性 ，符合SCI科学体系的基本逻辑 。

      综上 ，腾博会官网视角呼吁广大中医药研究人员 ，从本研究中吸取精华 ，努力能满足以上3个条件 ，一定会有更多优秀的中药复方文章出现在高质量的SCI杂志中 。