首先使用AG模型小鼠检测PEEPA的治疗作用（图1A） ，PEEPA可降低胃炎组织学指数和泌酸萎缩评分 。同时PEEPA能恢复胃腺的数量和完整性以及增殖细胞的数量 ，并抑制免疫细胞浸润（图1B-D） 。接着使用广泛用于评估GSC活性的胃类器官作为模型 。相比于对照组 ，PEEPA能增加类器官的大小（图1E） 。qPCR结果显示谱系特异性标记基因 ，包括SST(编码生长抑素) 、胃泌素 、TTF2和Muc5ac的表达显著增加(图1F)  。

图1 PEEPA具有治疗AG作用

作者使用RNA-Seq分析PEEPA治疗三天的AG模型小鼠的胃样本 ，KEGG和GO分析表明 ，细胞增殖 、受体酪氨酸激酶特别是EGFR 、Jak-Stat通路 、Nod样通路 、抗原递呈和ERK通路被激活 ，Ca²⁺和PKG通路 、氨基酸代谢 、免疫反应和肌肉收缩相关基因受到抑制（图2A-B） 。GSEA分析证实了PEEPA治疗组细胞分裂和DNA修复相关基因的富集（图2C） 。接着作者测试PEEPA是否可以在胃类器官培养中取代EGF 、WNT3a 、FGF10或noggin的作用 。这表明PEEPA含有和EGF活性的相似的生物活性成分 ，因为EGF定位于胃干细胞niche, 说明PEEPA的活性成分可能作用于胃干细胞 。WB实验表明 ，不同批次的PEEPA可激活EGFR 、ERKs和STAT1 ，但不能激活Akt1或STAT3（图2E） 。

为了鉴定PEEPA的生物活性成分 ，作者使用了以EGFR的胞外结构域为诱饵的亲和捕获-质谱法(图3A) 。从PEEPA中鉴定了7个多肽 ，发现其中PEEPA-P1和PEEPA-P5可以激活JAK-STAT1信号 ，其中PEEPA-P5的作用最大（图3B-C） 。质谱分析在PEEPA(两个批次)中都检测到了PEEPA-P5(图3D) ，体外EGF-EGFR相互作用分析表明 ，PEEPA-P5使EGF-EGFR相互作用增加了10.6倍（图3E） 。SPR实验也验证了PEEPA-P5和EGFR的结合（图3F） 。

图3 鉴定PEEPA中的EGFR结合肽

与PEEPA相似 ，PEEPA-P5也促进了有机体的生长和促进了有机体中各种细胞类型的分化(图4A ，B)  。同时 ，PEEPA-P5能显著增加AG患者来源的类器官的存活率和生长 ，尽管它轻微抑制了NAG（非萎缩性胃炎）患者来源的类器官的生长（图4C-E） 。

本文通过亲和捕获-质谱法发现 ，中药康复新的浓缩肽混合物（PEEPA）含有一种生物活性肽（PEEPA-P5） ，可通过激活GSC和抑制炎症来治疗AG 。这种肽通过稳定EGF-EGFR复合物 ，激活EGFR下游ERK和Stat1通路 ，促进胃干细胞激活 ，进而促进胃上皮再生 ，从而促进胃类器官生长和粘膜恢复 。这项研究深化了对AG发病机制的理解 ，确定了一种具有治疗AG潜力的天然肽 。